la linea SaOs è costituita da cellule che crescono adese alla superficie del recipiente di cultura in vitro (piastra petri, fi RELAZIONE LABORATORIO DI CULTURE CELLULARE CELLULE JURKAT Nelle giornate di laboratorio abbiamo seguito la crescita delle cellule Jurkat #49. Queste cellule crescono in sospensione per tale ragione è stato possibile contarle tramite la camera di Burker e il conta-cellule automatico. TEMPO(ore) N° cellule/ml 0 114924 24 294140 48 652020 75 1328060 96 2123920 Ecco la risultante curva di crescita: La curva segue l'andamento ideale della crescita cellulare, che prevede un iniziale fase di latenza seguita da una fase di crescita esponenziale, e in fine vi è la fase di plateau, in cui la crescita rimane pressoché costante. CALCOLO DEL TEMPO DI DIMEZZAMENTO: TEMPO(ore) tempo di dimezzamento 0 24 17,70142724 48 20,89840085 75 26,30727156 96 31,00046933 Il tempo di dimezzamento ideale è di circa 24h, mentre dai miei risultati risultano pressoché distanti. DETRMINAZIONE CICLO CELLULARE Sono state prelevate circa 1000.000 di cellule(jurkat), vengono centrifugate e unite al tampone a base di citrato, il quale ha il compito di preservare il nucleo. Successivamente viene annesso il solvente lisante Dall'analisi citoflorimetrica sono pervenuti questi dati: Nuclei in fase percentuale nuclei poliploidi in fase percentuale G1 (canale64) 20,1% G1 37,4% S 14,8% S 16,6% G2 (canale127) 37,4% G2 6,6% Sommando le percentuali di G1,S,G2,che corrisponde alla G1poliploidi,e le percentuali di S poliploidi e G2 poliploidi si ottiene il 95,5%; l' 0,5% corrisponde al DNA delle cellule morte a causa delle metodiche precedentemente effettuate. COLORAZIONE DEI VETRINI SECONDO MAY-GRUNWALD Il colorante May Grunwald che reagisce colorando di azzurro i granuli citoplasmatici sensibili al blu di metilene, mentre tinge di rosa i granuli sensibili alla cosina. L'altro colorante associato, Giemsa colora i nuclei. Con questi due coloranti si fissano e si pigmentano i vetrini precedentemente preparati, con una sospensione cellulare di circa 150.000cell/mL e PBS. CELLULE SaSOs La linea SaOs è costituita da cellule che crescono adese alla superficie del recipiente di cultura in vitro (piastra petri, fiasca); per poterle analizzare bisogna staccarle da suddetta superficie. In laboratorio ciò è stato compiuto tramite la tecnica di tripsinizzazione. Questa tecnica, vede l'impiego della tripsina, enzima proteolitico che lisa le proteine che consentono l'adesione delle cellule. Dopo aver rimosso il terreno presente nelle fiasche, sono stati aggiunti appropriati cm3 di tripsina e si è fatto agire per qualche minuto. Ad azione completata è stato aggiunto del terreno completo contenente il siero per bloccare l'azione proteolitica, per impedire che la sua attività enzimatica provochi la morte cellulare. Si è sospeso, in seguito, il preparato e si sono effettuate conte precise con la camera di Burker, risultato ottenuto: 1875000cellule/mL Si è proceduto con il saggio della f Continua »