Il Gel In Poliacrilammide - Appunti di Biologia Molecolare gratis Studenti.it
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Dispense di biologia molecolare. Separazione dei frammenti in gel di poliacrilammide e colorazione: metodo Silver staining. Trattamento dei vetri. Preparazione Gel in Poliacrilammide. Preparazione delle soluzioni per il fissaggio e lo sviluppo (5 pagine formato doc)

VOTO: stellastellastella Appunto inviato da krystalyx

Il metodo Silver staining è un’alternativa non radioattiva per l’analisi di sequenze, basata su una rilevazione fotochimica di macchie d’argento originariamente disegnata per la rilevazione di proteine. I parametri fondamentali per una buona riuscita dello sviluppo del gel sono: la purezza dell’acqua e la freschezza dei reagenti utilizzati. Il gel, una volta terminata la corsa elettroforetica, viene fissato in acido acetico per rimuovere il tampone dell’elettroforesi e l’urea presente nel gel. Il fissaggio è molto importante per la sensibilità del metodo, un fissaggio troppo breve o troppo lungo comporterebbe un inefficiente sviluppo del gel Un tempo minimo di 5 minuti in immersione in acido acetico è in grado di mantenere nei limiti la rilevazione dei vari frammenti di DNA. Questo passaggio permette di rimuovere sia l’acido acetico che i componenti solubili del gel che interferirebbero con la colorazione. E’ opportuno effettuare un minimo di risciacquo in acqua de-ionizzata, tenendo conto che se passa troppo tempo lo sviluppo può diventare troppo sbiadito. Continua »

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