Estrazione degli acidi nucleici (21 pagine formato pps)
Digestione della parete cellulare con enzimi (lisozima). E’ indicato per la rottura di cellule batteriche GRAM +, costituite dalla parete cellulare di peptidoglicano. Crea dei buchi nella parete favorendo l’ingresso di acqua e l’esplosione cellulare. Massima sterilità, 4°C. Estrazione degli acidi nucleici. Liberare il contenuto cellulare (si preferiscono metodi blandi) Per eliminare RNA o DNA: RNAsi o DNAsi Per deproteinizzare il campione: fenolo saturo di acqua o miscela fenolo/cloroformio (denatura le proteine ma non gli acidi nucleici) Centrifuga: tre fasi Ripetere l’operazione più volte. Aggiungere 2 volumi di EtOH assoluto alla fase acquosa Congelare a -20, -80 °C Centrifugare Eliminare supernatante Il pellet contiene gli acidi nucleici Tutte le operazioni si eseguono a 4 °C in condizioni di massima sterilità. Continua »
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