CHEMILUMINESCENZA - SISTEMI LUMINESCENTI -LE FOSFATASI etc..

INDICE INDICE INTRODUZIONE Terminologia e definizione p.3 CHEMILUMINESCENZA p.4 Caratteristiche generali p.4 Classificazione p.6 SISTEMI LUMINESCENTI p.7 Stabilit… e reattivit… dei 1,2 diossoetani p.9 Amplificazione dell'efficenza chemiluminescente p.16 Applicazioni p.19 LE FOSFATASI p.20 LA FOSFATASI ALCALINA p.20 Valori di fosfatasi alcalina p.23 ISOENZIMI DELLA FOSFATASI ALCALINA p.25 SCOPO DELLA TESI p.26 MATERIALI E METODI p.28 Materiali p.28 Soluzioni utilizzate e tamponi p.28 Campioni di siero p.29 Luminometro p.29 RISULTATI E DISCUSSIONE p.31 OTTIMIZZAZIONE DEL SISTEMA DI ANALISI CON SOLUZIONI STANDARD p.31 Scelta del tampone p.31 Tempi e temperature di incubazione p.32 Miscela chemiluminescente p.33 OTTIMIZZAZIONE DELLE CONDIZIONI SPERIMENTALI DI ANALISI NEL SIERO p.33 Sieri di controllo p.33 Tamponi, MCL, Volume del campione p.33 Effetto BSA p.37 Inattivazione per riscaldamento p.41 Aggiunta di EDTA p.46 Campioni di siero p.46 Correlazione con il metodo spettrofotometrico e Valutazione della variabilit… p.53 ANALISI DEGLI ISOENZIMI p.60 CONCLUSIONI p.64 RINGRAZIAMENTI p.65 BIBLIOGRAFIA p.66 ANALISI DELLA FOSFATASI ALCALINA NEL SIERO MEDIANTE TECNICHE LUMINESCENTI INTRODUZIONE Terminologia e definizione Il fenomeno della luminescenza, o emissione di luce, si realizza in una vasta serie di fenomeni chimico-fisici come viene riportato nella Tabella I [1]. Tabella I TIPO CAUSA Elettroluminescenza corrente elettrica in gas ionizzato Radioluminescenza materiale radioattivo incorporato nel fosforo Chemiluminescenza reazione chimica Bioluminescenza reazione enzimatica Termoluminescenza temperatura e radioattivit… Triboluminescenza rottura di cristalli Sonoluminescenza onde sonore in liquidi Fotoluminescenza assorbimento di luce infrarossa visibile, U.V. Tra queste diverse forme di emissione di luce vi Š la chemiluminescenza, nella quale l'emissione avviene nel corso di una reazione chimica [2]. La chemiluminescenza consiste quindi nell'emissione di fotoni da parte di una molecola come risultato di una reazione chimica esoergonica in cui un intermedio, o un prodotto finale, viene a trovarsi in uno stato elettronico eccitato e decade allo stato fondamentale con emissione di luce [3]. La bioluminescenza Š un particolare tipo di chemiluminescenza che si osserva nei sistemi biologici in cui una proteina catalizza una reazione aumentandone l'efficienza [4]. La fluorescenza, che viene spesso confusa con la chemiluminescenza, si differenzia da questa in quanto necessita di una sorgente di energia esterna sotto forma di luce per effettuare successivamente l'emissione. Le rese quantiche generalmente sono dell'ordine di 1-5% nelle reazioni chemiluminescenti ma possono avvicinarsi al 100% nelle reazioni bioluminescenti. In figura 1 sono schematizzati i processi che portano all'emissione di luce in chemiluminescenza e bioluminescenza. CHEMILUMINESCENZA Le reazioni chimiche esotermiche generalmente rilasciano energi Continua »