ALLESTIMENTO ED OSSERVAZIONE DI CAMPIONI BIOLOGICI AL MICROSCOPIO ELETTRONICO A SCANSIONE E A TRASMISSIONE

INTRODUZIONE ISTITUTO TECNICO INDUSTRIALE `F.CORNI' Anno Scolastico 1998/99 ALLESTIMENTO ED OSSERVAZIONE DI CAMPIONI BIOLOGICI AL MICROSCOPIO ELETTRONICO A SCANSIONE E A TRASMISSIONE. TESINA DI MARCO BERNABEI classe IV A s/t Tutor universitario: Tutor dell'istituto Prof. G. Vitale Prof. I. Pasquali-Ronchetti Dott. D. Guerra INDICE I Parte - Introduzione Procedura di preparazione dei campioni biologici per l'osservazione al TEM 1.1 Fissazione 1.2 Disidratazione 1.3 Inclusione 1.4 Taglio 1.5 Colorazione 2 Microscopio elettronico a trasmissione 2.1 Funzionamento del TEM 2.2 Osservazione al TEM 3 Procedura di preparazione dei campioni biologici per l'osservazione al SEM 3.1 Fissazione 3.2 Disidratazione 3.3 Critical point drying (CPD) 3.4 Metallizzazione 4 Microscopio elettronico a scansione (SEM) 4.1 Funzionamento del SEM II Parte 5 Anatomia della pelle 5.1 Epidermide 5.2 Derma 6 Anatomia dell'orecchio 6.1 Nozioni sull'orecchio medio 6.2 La membrana timpanica 7 Protocollo sperimentale 8 Bibliografia 9 Iconografia 10 Ringraziamenti I PARTE INTRODUZIONE Il centro di Microscopia elettronica della sezione di Patologia generale del Dipartimento di Scienze Biomediche, da me frequentato, si occupa dello studio di malattie umane e in particolare di quelle concernenti ai tessuti connettivi. Si tratta per lo più di patologie rare, per le quali si studiano gli effetti terapeutici e le cause, ricorrendo eventualmente all'analisi di ratti transgenici, nei quali vengono provocate appositamente. Nei laboratori si svolgono due tipi di studio: uno morfologico effettuato al microscopio ottico ed elettronico, che, come dice la parola stessa, è mirato all'analisi delle forme e delle strutture dei tessuti; uno biochimico per l'analisi delle molecole che formano i tessuti stessi. I laboratori principali sono cinque: - uno chimico, nel quale si preparano soluzioni per la preparazione dei campioni da osservare al microscopio e per gli studi biochimici; - uno dotato di ultramicrotomi per il taglio dei campioni (operazione da effettuare prima di poterli osservare); - due forniti ciascuno di un microscopio elettronico a trasmissione (TEM): il primo risalente agli anni ' 60 (Siemens), l'altro agli anni `80 (Jeol); una camera oscura per lo sviluppo e la stampa delle fotografie fatte al microscopio elettronico. Durante il mio stage, ho partecipato all'insieme dei processi che intercorrono tra il prelievo e l'osservazione al microscopio elettronico a trasmissione di una biopsia cutanea, e all'osservazione al microscopio elettronico a scansione di membrane timpaniche di ratto, sottoposte a lesione e riparazione cicatriziale tramite sostanze sintetiche contenenti acido ialuronico. 1 PROCEDURA DI PREPARAZIONE DEI CAMPIONI BIOLOGICI PER L'OSSERVAZIONE AL TEM 1.1 Fissazione E' un procedimento fisico o chimico che deve essere effettuato subito dopo il prelievo del tessuto e serve per bloccare la decomposizione delle cellule e dei batteri (procarioti). La fissazione fisica avviene medi Continua »